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LA TÉCNICA ELISA
La técnica de Elisa es un procedimiento de ensayo inmunoenzimático cuyo nombre resulta de la asociación de las iniciales de su denominación inglesa (enzyme linked inmuno sorbent assay). Como todo ensayo inmunoenzimático, la prueba recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó anticuerpos marcados con una enzima, para revelar el reactivo complementario a nivel de distintos fluidos biológicos.
Fue concebida independientemente en 1971 en Suecia y Holanda, siendo aplicada posteriormente a la revelación y a la cuantificación de los más diversos tipos de sustancias presentes en líquidos orgánicos (antígenos, anticuerpos, hormonas, fármacos, etc.).
El área de sus aplicaciones médicas se ha expandido en forma sostenida, siendo utilizada como el primer sustituto de la técnica de Radioinmunoensayo* en la medición de hormonas, inmunoglobulinas, antígenos y anticuerpos en infecciones bacterianas, micósicas, parasitarias o virósicas.
De un modo general se procede a la fijación de uno de los componentes de la reacción inmunológica (antígeno Ag o anticuerpo Ac) a un soporte sólido, poniendo luego ese sistema en contacto con una fase fluida que contiene el reactivo complementario. El complejo inmunológico formado es enfrentado luego a las moléculas capaces de reconocer a su componente más superficial, marcadas con una enzima (peroxidasa de rábano picante); agregándose posteriormente un sustrato cromogénico de la enzima marcadora. La existencia de una reacción inmunológica se demuestra y se cuantifica midiendo espectrofotométricamente la cantidad de producto enzimático resultante.
PROCEDIMIENTOS GENERALES DE UNA TÉCNICA ELISA:
El procedimiento se efectúa de dos formas principalmente:
Método indirecto: También conocido como método Sándwich (Anticuerpo-antígeno-anticuerpo), se basa en la fijación de un anticuerpo a la fase sólida, el cual atrapa los antígenos homólogos en la muestras que posteriormente son identificados con un anticuerpo específico marcado con una enzima. En estos casos la cantidad de antígeno es directamente proporcional a la cantidad de producto enzimático formado.
Método competitivo: Se basa
en la competencia que se establece entre un antígeno marcado enzimáticamente y
el mismo antígeno sin marcar (muestra objetivo) al ser colocados frente a una
cantidad limitada del anticuerpo homólogo fijado a la fase sólida. En
estos casos la cantidad de antígeno es indirectamente proporcional a la
cantidad de producto enzimático formado.
TIPOS DE TÉCNICAS ELISA:
Técnicas cualitativas:
Son técnicas Elisa que nos indican la ausencia ó presencia de un antígeno o anticuerpo determinando. Los kits incluyen controles positivos y negativos para poder determinar esta presencia o ausencia de antígenos.
Ejemplo: HIV, Hepatitis, etc.
Técnicas cuantitativas:
Son técnicas Elisa que nos indican la cantidad de antígeno ó anticuerpo presente en la muestra. Los kits incluyen +/-6 standards (sueros de diferentes concentraciones del antígeno objetivo) con los cuales se realiza una curva para así poder determinar la concentración de la muestra.
Ejemplo: Hormonas, Marcadores tumorales, etc.
Técnicas semi-cuantitativas:
Son técnicas Elisa que nos dan un indicio de la cantidad de antígeno ó anticuerpo presente en la muestra con la utilización de un standard ó calibrador
Ejemplo: ANA, nDNA, etc.
QUE EQUIPOS SE NECESITAN PARA MONTAR LAS TÉCNICAS ELISA
* Radioinmunoanálisis RIA, representa una variedad de técnicas inmunológicas en las cuales un radio nucleido es utilizado para detectar antígenos ó anticuerpos.
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